秦学¹，王维²，周建仁²，何州²

（1．聊城万合工业制造有限公司，山东 聊城252022；2.杭州华东医药集团康润制药有限公司，浙江 湖州313301）

1 引言

辅酶Q₁₀又名泛醌10，是一种脂溶性醌，其结构类似于维生素K，因其母核六位上的侧链——聚异戊烯基的聚合度为10而得名，是一种醌环类化合物^[1]。

分子式：C59H90O4

分子量：863.36

结构式：

辅酶Q₁₀是人类生命不可缺少的重要元素之一，能激活人体细胞和细胞能量的营养，具有提高人体免疫力、增强抗氧化、延缓衰老和增强人体活力等功能，医学上广泛用于心血管系统疾病^[2]。

制备型高效液相色谱（Prep-HPLC）作为一种高效的分离纯化技术，具有单次分离时间短、易于操作、分离效率高等优点，是天然产物、中草药、生物活性物质有效成分分离提纯的核心设备^[3,4]。运用该制备型高压液相色谱系统进行分离提取高纯度的天然辅酶Q₁₀，具有分离效率高、节省溶剂等优点。同时设备采用动态轴向加压技术装填色谱柱，具有柱床稳定性好、柱效高的特点，可用于该产品的批量连续性生产。

2制备实验

2.1仪器与试剂

聊城万合工业制造有限公司生产的制备型高压高效液相色谱柱（63×630mm，含动态加压液压站）；GLP3250制备型高压输液泵；UC-3292紫外-可见检测器；以及Rheodyne3725i六通进样阀（配5ml定量环）、DM动态混合器、色谱工作站软件及电脑等。

填料选择球形硅胶（富士硅化学有限公司）。

流动相为正戊烷：丙酮（均为工业级，使用前先经过蒸馏处理后用孔径为0.45um的微孔滤膜过滤）。

说明：实验所用到的流动相（溶剂）以及样品和实验室仪器（如溶剂过滤器、超声波清洗器等）由杭州华东医药集团康润制药有限公司提供。

2.2样品配制

抽取样品溶液10-15ml经针式滤膜过滤，舍弃初滤液，续滤液收集至洁净容器中备用。

2.3制备色谱条件   

2.4制备过程

称取800g硅胶加入2000ml正戊烷超声、搅拌30min并脱气，将搅拌好的硅胶悬浊液缓慢注入柱体内，沉降120min，装好柱头密封元件，轴向加压压缩柱床至出液管无液体流出（装柱压力为1200psi，柱床高530mm）；

用进样针精密抽取样品5ml，手动注射进样；

按已设定流速进行等度洗脱；

根据检测器图谱收集层析流出液。

2.5实验结果及讨论

在上述色谱条件下，得到制备色谱图如图1所示：

将两次单峰收集液分别浓缩至约50ml后取样HPLC检测

经HPLC检测，第一个峰保留时间为11.91min（与起始样品杂质保留时间（11.68）一致），归一化面积百分比为92.80%；第二个峰保留时间为9.75min（与起始样品Q₁₀保留时间（10.45）一致），归一化面积百分比为94.81%。

3 结论

    本实验建立了制备型高效液相色谱法分离提取天然辅酶Q₁₀的实验条件，通过检测分离结果发现，该制备型液相色谱系统满足分离效果要求，同时操作方便，产品纯度高，该设备和方法可用于天然辅酶Q₁₀的大量制备提取，另一方面，收集到的较高浓度的辅酶主要杂质，也可供进一步分析研究。

[参考文献]

[1] Jones K，Hughes K，Mischley L，et al. Coenzyme Q₁₀ and cardiovascular health. Altern Ther Health Med，2004,10:22-30.

[2] 马志科,昝林森,陈芳.辅酶Q₁₀制备技术及其在医学中的应用[J]. 动物医学进展,2006,27(8):76-81.

[3] Hostettmann K，Marston A，Hostettmann M．Preparative Chromatography Techniques．Applications in Natural Product Isolation [J]．Plant Growth Regulation，1997，8 (4)：375—376.

[4] 王永禄，王丽瑶.制备型高效液相色谱法及其在中药研究中的应用[J].中医药通报，2006,5（3）：60-63.